Иммуномоделирующий эффект совместного применения структурированных растворов и тестируемых доз кортикостероидов в терапии хронического вирусного гепатита В

Н. Э. Д жумаева*, М. В. Залялиева^*, Ф. В. Болкунова^*

1. Введение

Проблема вирусных гепатитов является ведущей в инфекционной патологии. Согласно расчетным данным ВОЗ, в разных странах мира зарегистрировано более миллиарда носителей Hbs Ag, являющихся источником инфицирования населения [1]. На настоящий момент идентифицировано несколько возбудителей вирусного гепатита, однако, повсеместно наибольшего внимания требует вирусный гепатит В, обладающий высоким хрониогенным потенциалом, с формированием хроническим болезней (ХВГВ). Этиопатогенетической терапией ХВГ, направленной на подавление репликации вируса, является противовирусная терапия препаратами экзогенного интерферона или стимуляторами эндогенного интерфероногенеза [1]. Однако, по данным различных авторов, устойчивых, благоприятных результатов лечения от применения, к примеру, альфа-интерферона, удается достичь лишь у 20-40 % больных. Изучению действия глюкокортикоидов (ГК) при ХВГВ посвящены ряд работ, порой с противоречивыми результатами [2]. По мнению одних авторов, ГК не показывают отчетливых преимуществ перед другими методами лечения, по мнению других авторов, кортикостероиды уменьшают смертность в ранней, наиболее активной фазе болезни, а при длительном применении снижают активность процесса, а также качественно улучшают состояние жизни больных. В доступной нам литературе имеются единичные сообщения о применении биоинформационных методов: препарата Векрома, биологически активной жидкости в лечении острых вирусных гепатитов и хронического вирусного гепатита В в стадии ремиссии [3, 4]. Однако мы не нашли данных о совместном применении структурированных растворов и тестируемых доз кортикостероидов у больных ХВГВ в стадии активизации клинических проявлений, что и обусловило выбранное направление нашей работы.

Цель работы: изучение влияния структурированных растворов по методу Р. Фолля - В.Н. Сарчука и тестируемых доз кортикостероидов при их совместном применении на показатели клеточно-гуморального иммунитета у больных ХВГВ в стадии активизации клинических проявлений.

2. Материалы и методы

Обследовано 13 больных хроническим вирусным гепатитом В (2 женщины, 11 мужчин) в возрасте от 9 лет до 36 лет, поступивших в 1-ю Городскую инфекционную больницу г. Ташкента. Иммунологические исследования проводились на базе Института иммунологии АН Республики Узбекистан в период с 1997года по 1998 год.

Для определения суточных доз ГК нами применялся т.н. "медикаментозный тест" по Р. Фоллю, проводимый в процессе электропунктурной диагностики [5]. Известна методика "тестирования" разовых доз фармакологических препаратов. Нами в процессе проводимых исследований был разработан метод тестирования суточных доз аллопатических препаратов, в том числе кортикостероидов и гормонов щитовидной железы [6]]. В табл. 1 представлены данные по изменению функциональной активности органов эндокринной системы при различных заболеваниях, определяемые по методу Р. Фолля с использованием микрорезонансных контуров (МРК) В.Н. Сарчука, которые, на наш взгляд, подтверждают существующее мнение об общих

механизмах ответной реакции организма на развитие различных патологических процессов. Клиническая компенсация патологического процесса достигалась применением структурированных растворов (СР), представляющих собой структурно-информационную жидкость с гомео- и изопатическими свойствами, совместно с оттестированными в процессе электропунктурной диагностики по Р. Фоллю суточными дозами ГК, определяемыми на точках акупунктуры (ТА) надпочечников. ТА надпочечника располагается в проекции первой точки меридиана тройного обогревателя, а также в 22-ой точке меридиана мочевого пузыря. Назначение ГК проводилось с учетом физиологических суточных ритмов секреции стероидов, в связи с чем вся суточная доза ГК вводилась утром, во время максимальной секреции эндогенных гормонов, с целью оказания меньшего тормозящего эффекта на гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковую систему. Для проведения стероидной терапии был выбран преднизолон. Проведенные исследования по дозам ГК не обнаружили зависимости определяемой дозы стероида от возраста пациента, массы его тела и пола. Общая курсовая доза преднизолона (5 мг) составляла от 37,5 мг до 100 мг препарата. Назначение препарата осуществлялась по следующей схеме: в первые дни давалась оттестированная суточная доза стероида, в последующем - снижение дозы и отмена препарата.

По нашему мнению, СР, воздействуя на пространственную молекулярную организацию воды в клетках организма, приводят к восстановлению нарушенной патологическим процессом структурной организации внутри- и внеклеточной воды как в печени, так и в органах и системах организма, связанных с печенью патологическим процессом, что приводит, в свою очередь, к нормализации протекания биофизических и биохимических процессов в них. Совместно применяемые ГК, на наш взгляд, одновременно компенсируют эндогенный дефицит стероида, производя таким образом эффект заместительной терапии.

При применении СР для лечения больных ХВГВ обязательно включение в программу рецепта: МРК нозода вируса гепатита В, нозода "хронический гепатит", МРК органных препаратов органов брюшной полости: поджелудочной железы, тонкого, толстого кишечника; МРК органов иммунной системы: селезенки, РЭС, надпочечников и другие; МРК гомеопатических препаратов. Однако терапия СР проводилась строго индивидуально после осмотра каждого больного, с введением в рецепт дополнительно оттестированных МРК. Назначение СР проводилось в зависимости от степени тяжести состояния больного (кратность) и возраста. Разовая доза препарата для взрослых составляла 30 мл, для детей - 15-25 мл. Прием препарата первые 5 дней осуществлялся 3 раза в сутки, последующие 5 дней - 2 раза в сутки, далее - однократно. Общий курс терапии составлял 20-25 дней [7]. Исследования иммунологического статуса проводили дважды; до начала лечения и через 20 дней после окончания приема препаратов.

Таблица 1

Данные функциональной активности органов эндокринной системы при различных заболеваниях

(по Р. Фоллю - В.Н. Сарчуку)

Название заболевания	Общее число больных		Функциональная недостаточность коры надпочечников	Патоморфологически измененная ткань щитовидной железы		Органы ЦНС		Вилочковая железа
	взрослые	дети		гиперти- реоз	гипоти- реоз	Гипота- ламус	гипо- физ
Хронический вирусный гепатит (В, С).	20	7	27	4	16	7	3	6
Ревматоидный артрит	15	2	16	1	16	6	6	2
Кожные заболевания (витилиго, псориаз, экзема)	12	2	14	-	10	6	2	2
Бронхиальная астма	4	-	4	-	4	-	-	-
Аутоиммуный тиреоидит	4	-	4	-	4	2	-	-
Онкология (рак молочн. железы, рак матки, рак поджелуд. железы, рак предстат. жел., лимфосаркома)	6	-	6	-	4	3	2	-

Лимфоидные клетки выделяли из венозной крови в градиенте плотности феколл-верографина по модифицированному методу Boyum (плотность - 1,077), отмывали от градиентного раствора и ресуспендировали в среде 199.

Т-лимфоциты определяли методом спонтанного розеткообразования (Yondell at al., 1973), В-лимфоциты в тесте иммуноглобулин-связывающих розеток - по методу Е.Р.  Кудрявцевой (1983г.). Иммунорегуляторные субпопуляции Т-лимфоцитов СD4⁺, СD8⁺ и СД16⁺ (естественные киллеры) определяли с помощью моноклональных антител ЛТ-4, ЛТ-8 и ЛНК-16 в реакции непрямого розеткообразования (Mils, 1987) (производство Института иммунологии МЗ РФ, г. Москва). Концентрацию иммуноглобулинов класса М, G и А определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре (Mancini at al., 1965) с моноспецифическими антисыворотками (производство Института эпидемиологии и микробиологии им. Н.Д. Гамалеи). Фагоцитарную активность нейтрофилов изучали с помощью стандартных частиц латекса.

3. Результаты

Для анализа полученных данных все больные были разделены на 2 группы: 1 группу составили дети в возрасте 9-14 лет в количестве 7 больных, 2-ю группу - взрослые в количестве 6 больных (2 женщин, 4 мужчин), а контрольную группу - здоровые лица в количестве 20 человек (жители г. Ташкента).

Исследования показали, что в первой группе больных до начала лечения наблюдался Т-иммунодефицит, выражающийся в диспропорции основных иммунорегуляторных субпопуляций

Т-лимфоцитов (табл. 2). Так, на фоне снижения (у 71 % больных) СD3⁺ лимфоцитов отмечено достоверное снижение количества клеток с маркерами СD4⁺ (100 % больных), характерными для хелперной популяции, что свидетельствует о неполноценном иммунном ответе в организме обследованных. Наблюдалось угнетение факторов неспецифической реактивности организма: фагоцитарная активность нейтрофилов (ФАН) была снижена у 71 % больных, количество цитотоксических NК-клеток (СD16⁺) было повышено у 86 % больных , причем рост СD16⁺ зависел от продолжительности заболевания. Механизм действия NК-лимфо-цитов подчиняется принципам иммунного ответа. Известно, что есть взаимосвязь между активностью естественных клеток-киллеров и течением инфекционного процесса. Биологическая роль NК-лимфоцитов определяется их избирательной эффекторной функцией, способностью к лизису чувствительных клеток-мишеней, при этом основным этапом киллинга является повреждение клеточных мембран с помощью протеолитических ферментов азурофильных гранул.

Таблица 2

Динамика иммунологических показателей у больных ХВГВ в процессе лечения структурированными растворами совместно с тестируемыми дозами кортикостероидов

Показатели	Дети от 7 до 14 лет.			Взрослые
	Здоровые n = 10	ХВГВ n = 7	Р	Здоровые n = 10	ХВГВ n = 6	P
Лейкоциты /1 мкл	5, 8+ 0,2	6,4 + 0,6 / 5,5+ 0,4	>0,05	5,8+ 0,2	4,1+ 0,6 / 5,2+ 0,8	>0,05
Лимфоциты, %	38,0+ 0,9	40,7+ 3,2 / 44+ 2,4	>0,05	38,0+ 0,9	44,8+ 1,7 / 37,6+ 2,4	<0,05
Т-лимфоциты, %	67,0+ 1,7	45,2 + 4,02*/ 67,8+ 3,04	<0.01	67,0+ 1,7	54+ 5,4*/ 68,6+ 3,2	<0,05
В-лимфоциты (%)	18,0+ 1,8	19,2+ 2,1 / 16,5+ 1,2	>0,05	18,0+ 1,8	17,0+ 1,7 / 16,5+ 1,5	>0,05
СD4^+ , %	36,0+ 1,3	20,1+ 1,2*/ 31,0 + 1,8	<0,01	36,0+ 1,3	19,5+ 1,9*/ 33,7+ 2,3	<0,05
С D8^+ , %	18,0+ 0,7	19,7+ 1,6 / 18,3+ 1,3	>0,05	18,0+ 0,7	20,8+ 3,5 / 17,6+ 1,7	>0,05
NК-лимфоциты, %	13,0+ 0,8	18,3+ 3,4*/ 10,8+ 1,2	<0,05	13,0+ 0,75	19,5+ 1,9*/ 7,7+ 0,9	<0,001
Фагоцитоз	61,0+ 1,8	43,8+ 3,6*/ 59,2+ 3,2	<0,01	61,0+ 1,8	49,6+ 4,3*/ 60,5+ 3,7	<0,05
Ig A, мг %	195,0 + 7	200,9+ 21,9 / 178,6+ 27,3	>0,05	195,0+ 7	255,2+ 18,1 / 175 + 14,0	>0,05
Ig M, мг %	138 + 5	139,4+ 11,3 / 105,8+ 16,6	<0,05	138+ 5	122,7+ 18,4 / 110,0+ 15,6	>0,05
Ig G, мг %	1065+ 25	1131+ 98,0 / 1040,6+ 95,8	>0,05	1065+ 25	1201,5+ 99,4 / 1180+ 94,8	>0,05

Примечание:

/ - в числителе показатели до лечения, в знаменателе - после лечения; P - достоверность различий относительно данных до лечения (р < 0,05); * - достоверность различий относительно показателей здоровых лиц.

Таким образом, повышенные показатели NК-клеток отражают степень иммунного ответа против клеток-мишеней. Показатели Т-супрессоров были повышены у 57 % больных, однако, в среднем достоверной разницы с контрольной группой обнаружено не было. Интегральным показателем активности гуморального звена иммунитета является число В-лимфоцитов и продукция иммуноглобулинов. Следует подчеркнуть, что в наших исследованиях число В-лимфоцитов в среднем на группу обследованных было незначительно повышено (у 57 % больных), но достоверной разницы с данными контрольной группы обнаружено не было. Аналогичные изменения касались и Ig A и Ig G.

После проведенной терапии наблюдалось достоверное повышение содержания в крови СD3⁺-лимфоцитов, достигшего нормы. Повысилось содержание иммунорегуляторных субпопуляций СD4⁺ до уровня нормы у всех больных. Снизилось до нормального уровня содержание цитотоксических NK-клеток (СD16⁺), СD8⁺. Активизация факторов неспецифической реактивности организма у обследованных больных также отразилась на показателе фагоцитарной активности нейтрофилов: он возрос и достиг нижней границы нормы. Снизилось и достигло нормы содержание иммуноглобулинов Ig A и IgG, число В-лимфоцитов.

Анализ иммунологического обследования больных второй возрастной группы показал, что до начала проводимой терапии у 67 % больных наблюдалась лейкопения, относительный лимфоцитоз - у 100 % больных. Т-иммунодефицит проявлялся в снижении числа СD3⁺ лимфоцитов (83 % случаев) при сниженном содержании Т-хелперов у 100 % больных. Показатели Т-супрес-соров были повышены у 67 % больных, но без достоверной разницы с контрольной группой больных. ФАН была снижена во всех случаях, число NK-клеток регистрировалось значительно выше нормы у 100 % больных (табл. 2). Проведенная терапия привела к нормализации показателей числа лимфоцитов: их число снизилось до нормы у всех больных. Иммунорегуляторные субпопуляции СD4⁺ значительно выросли и достигли нормы в 100 % случаях. Уровня нормы достигло содержание СD16⁺, снизилось до нормы содержание СD8⁺. Уровень ФАН повысился и также достиг уровня нормы во всех случаях.

Таким образом, полученные нами результаты показали, что проведенная нами терапия структурированными растворами совместно с тестируемыми дозами кортикостероидов оказала выраженный эффект на показатели как клеточного, так и - в меньшей мере - гуморального иммунитета.

Было определено, что данная терапия обладает выраженным эффектом на неспецифические факторы иммунной защиты; в обеих возрастных группах мы наблюдали нормализацию количества ФАН и NK-клеток, увеличение содержания

СD3⁺-лимфоцитов, иммунорегуляторных субпопуляций Т-хелпе-ров, снижение количества Т-супрессоров.

Выводы

1. У больных ХВГВ в стадии активизации клинических проявлений наблюдается иммунодепрессивное состояние, сопровождающееся снижением числа СD3⁺, Т-хелперов, относительным увеличением содержания Т-супрессоров, ростом числа

NK-клеток (СD16⁺). Содержание ФАН снижается.

2. Совместное применение ГК и структурированных растворов позволяет в короткие сроки добиться выраженного влияния на показатели иммунитета у больных ХВГВ.

3. Назначение ГК должно проводиться строго индивидуально, после проведения "медикаментозного тестирования" по Р. Фоллю с определением суточных доз стероида.

4. Полученные данные позволяют рекомендовать применение структурированных растворов совместно с тестируемыми дозами кортикостероидов в практике лечения больных ХВГВ в стадии активизации клинических проявлений.

Литература

1. Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты в клинической практике.- СПб: Теза, 1996.- 306 с.

2. Апроксина З.Г. Хронический активный гепатит как системное заболевание. М.: Медицина, 1981г.- 248 с.

3. Кляп С.И., Голубенко О.Н. Лечение больных вирусным гепатитом А биологически активной жидкостью: Матер. науч. практ. конф. по электропунктурной диагностике и безмедикаментозному лечению биологически активной жидкостью по методу В.Н. Сарчука.- Симферополь, Таврия, 1992г.- С. 58-63.

4. Кривошеев В.Н. // Вестник биофизической медицины.- N 1.- 1992.- С. 47-48.

5. Ролик И.С., Фурсов С.Е., Филиппов А.А. Метод Р. Фолля в диагностике и терапии хронических интоксикаций.- М.: Грэгори Электроникс, 1993.- 109 с.

6. Патент N 04202 Р. Узбекистан. Способ тестирования разовой дозы фармакологических препаратов.

7. Патент N 5674 Р. Узбекистан. Способ лечения хронических заболеваний по Джумаевой Н.Э.

An Immuno-Modulating Effect of

Co-Application of Structurized Solutions and Tested Corticosteroids in Chronic Viral

B-Hepatitis Therapy

N.E. Dzhumaeva, M.V. Zalyalieva,

F.V. Bolkuniva

Summary

Therapy was conducted by intaking of structurized solutions (SS) prepared on the basis of chemically-pure clean de-structurized water together with daily doses of corticosteroids having been tested in electric acupuncture diagnostics by R. Voll. It is shown that treatment with the use of SS-solutions together with tested daily-doses of corticosteroids makes a positive impact on the immunity index. Meanwhile, normalization of the non-specific factor of protection (natural killers, phagocytic activity of neutrophils) was observed.

---

* Институт иммунологии АН Республики Узбекистан,

Республиканская Государственная научная медицинская библиотека Минздрава республики Узбекистан, г. Ташкент